BioResource Newsletter  Vol.4 No.7

 ナショナルバイオリソースプロジェクト
     「カタユウレイボヤとニッポンウミシダ」

     佐藤 矩行 
     京都大学大学院理学研究科 教授

カタユウレイボヤ・ニッポンウミシダ
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    はじめに

   海産無脊椎動物は古くから発生学、細胞学、生理学（神経生理学を含む）、生化学、生殖生物学、進化学などのさまざまな分野の研究に使われ、それぞれの分野で数多くの新知見の蓄積に貢献してきた。しかしながら、継代飼育の難しさから、海産無脊椎動物の多くは遺伝的背景を整備した研究材料とは、なかなかなり得なかった。最近になってゲノムが解読されるなどの背景を踏まえて、ようやく尾索動物のカタユウレイボヤ (Ciona intestinalis)と棘皮動物のニッポンウミシダ(Oxycomanthus japonicus)でバイオリソースとしての整備が整い、NBRPの中核的拠点形成プログラムとして前者を京都大学と筑波大学で、後者を東京大学で提供する事業が開始されている。

このようにして2-3ヶ月後に成熟した成体を得て、ユーザーに提供した。発送は毎週月曜日に定期的に行われ、2007年8月－2008年3月までの8ヶ月で約2万匹のホヤを研究者に提供している。その結果、天然資源に頼っていた時代には、初夏と秋の限られた季節しか使えなかったものを、通年、ユーザーが安定した数のカタユウレイボヤを得て研究できる状況が整っている。

 2. カタユウレイボヤのトランスジェニック系統リソース
   筑波大学では、カタユウレイボヤを用いてMinosトランスポゾンを利用して外来DNAをゲノムに挿入させたトランスジェニック系統を作製する技術を確立させている。この技術を利用し、幼生や成体の組織特異的にGFPなどの蛍光タンパク質を発現させたマーカー系統が作製されている。 さらに、Minos の挿入を利用して遺伝子を破壊した突然変異体作製法や、エンハンサートラップ法がこのホヤに導入されている。特にエンハンサートラップ法は、カタユウレイボヤがコンパクトなゲノムを持つことから効率よく進めることが可能である。また転移酵素を発現させた系統と、トランスポゾン挿入を持つ系統を掛け合わせることにより大量にエンハンサートラップ系統が作製出来るシステムが完成しており、この系により様々なマーカー系統が作製されている（図2）。
   サブ拠点の一つ筑波大学・下田臨海実験センターでは、カタユウレイボヤを約6,000匹飼育出来る飼育部屋を構築し（図3）、トランスジェニック系統を収集・飼育し、リクエストに応じて供給する業務を担っている。カタユウレイボヤの飼育には大量の海水が必要であり、特に内陸の研究グループでは飼育は困難である。我々のグループが臨海実験所にあるという長所を生かしてホヤ系統を飼育・維持し、それらをホヤ飼育が困難なグループに供給することでホヤ研究をサポート出来ればと考えている。
   現在NBRPとして所有する系統はおよそ47種類である。 このうち、組織特異的マーカー系統11種類、エンハンサートラップ系統31種類、突然変異体１種類について、実際に提供を進めている。これらの系統についてはウェブページ CITRES (http://www.shimoda.tsukuba.ac.jp/~ciona/index.html)において紹介しているので、系統の利用を考えている研究者は是非アクセスし、どのような系統があるのかを閲覧して頂きたい。また上記に含まれていない系統については、『このような系統は無いのか』などと担当者（笹倉：sasakura@kurofune.shimoda.tsukuba.ac.jp）まで、気軽にメールなどで訊ねて頂きたい。

図 2:カタユウレイボヤ・トランスジェニック系統におけるGFPの発現。 左は幼生の筋肉にGFPを発現させる系統。 右はエンハンサートラップ系統で、変態後の幼若体において内胚葉 （緑）と内柱（マゼンダ）をそれぞれGFPとRFPで染め分けている。

図3 : ホヤの飼育風景

   情報処理推進機構(IPA)が2008年7月15日に発表した「ソフトウエア等の脆弱性関連情報に関する届出状況 2008年第2四半期(4月～6月）」によると、届けられた脆弱性関連情報の内、ウェブサイトに関するものは全体の3分の2を占めているようです。そのウェブサイトに関する脆弱性の種類の内訳は、クロスサイト・スクリプティング (※ XSS) が68%で第1位,ファイルの誤った公開が18%で第2位となっています。(http://www.ipa.go.jp/security/vuln/report/vuln2008q2.html)

   そこでウェブアプリケーションの脆弱性を検知するためのツール 「ratproxy」 の紹介をしたいと思います。ratproxy は Google が以前は内部で使用したセキュリティ評価ツールを2008年7月1日にオープンソースソフトウェアとして公開したもので、 主にXSS※に関する脆弱性が存在する可能性を検知することが出来ます。対応する OS は Linux・FreeBSD ・MacOS X ・Windows (Cygwin) となっており、今回は ratproxy を Linux (Fedora Core 6) にインストールして使用してみたいと思います。 (http://googleonlinesecurity.blogspot.com/2008/07/meet-ratproxy-our-passive-web-security.html)

※XSS … Webサイトの訪問者の入力をそのまま画面に表示する掲示板などのプログラムが、悪意のあるコードを訪問者のブラウザに送ってしまう脆弱性のこと。 【IT用語辞典 e-Words (http://e-words.jp/) より引用、一部改変】

   ツールを使ってみよう！

① ratproxy をダウンロードした後パッケージを解凍して、makeします。
         

② ratproxy を起動して、ログを出力するファイル先を指定します。
         

③ウェブアプリケーションの脆弱性のチェックを行うブラウザに対して、プロキシの設定を行います。
ここでは ratproxy をインストールした PC のブラウザでチェックを行うので、プロキシの設定画面に
おいて IP アドレスに 「localhost」 と、ポートに 「8080」 と指定します。

④プロキシの設定を行ったブラウザを使って検査したいウェブサイトにアクセスすることによって、
テストを行います。

⑤ ratproxy のプログラムを「Ctrl + c」のショートカットキーなどで終了させます。

⑥ ratproxy-report.shを使って出力結果をHTML形式で出力します。
         

⑦ブラウザで出力されたファイルを表示させると、右図のようにカテゴリ別・危険度別に脆弱性の存在の可能性の有無を調べることが出来ます。　Windows (Cygwin) にインストールする場合は、Linuxとは違ってインストールする際に修正しなければならない箇所がある点には注意して下さい。 ぜひ ratproxy を1度使用してみて実際の効果を調べてみると良いのではないでしょうか？