ヒトES細胞プロジェクトの進行状況

平成１７年７月

• ヒトES細胞樹立研究計画について研究期間の延長申請の文部科学大臣確認を受け、研究機関を平成２０年４月まで延長した。

平成１５年１１月２５日 ; 新規ヒトＥＳ細胞株KhES-2 及び KhES-3について

• 提供を受けたヒト凍結胚について再生研への移送を行った。これらの胚を用いて、政府指針および文部科学大臣から確認（承認）を受けた樹立計画書に従って研究を進めた。
• 解凍直後から胚の発生（発育）が全く進行しない場合が 多かったが、２個が胚盤胞の段階まで到達した。
• これらの胚盤胞について、内部細胞塊を分離して、培養皿に移し、フィーダー細胞上での培養を行った。
• それぞれから安定して継代維持できる細胞株を２株樹立した。
• 樹立された細胞はそれぞれヒトＥＳ細胞に特徴的な形態を持ち、アルカリ性フォスファターゼ、SSEA-4などの未分化ＥＳ細胞特異的マーカーを発現していた。またいずれの細胞も正常な染色体数を保持していた。
• テラトーマ形成による分化能の解析からいずれも三胚様性の細胞分化能を持つことが確認された。 以上の結果から樹立された細胞株はヒトＥＳ細胞としての要件を満たすものと考えられる。
• これらの細胞株をそれぞれ KhES-2 及び KhES-3 と名付けた。

平成１５年５月; 樹立研究の現状と細胞分配の見通し

• 平成１５年１月までに、提供を受けたヒト凍結胚１０個以内について再生研への移送を行った。これらの胚を用いて、政府指針および文部科学大臣から確認（承認）を受けた樹立計画書に従って研究を進めた。
• 不妊治療においては、壊れた細胞の割合などの形態学的基準によってヒト胚を３ - ５段階のグレードに分類しているが、不妊治療に使われずに残った凍結胚の提供をうけた事情から、移送された凍結胚は殆ど全てが中間以下のグレードであった。
• 平成１５年１月下旬から２月下旬の間に、これらの凍結胚を解凍して培養を行った。
• 解凍直後から胚の発生（発育）が全く進行しない場合が多かったが、細胞分裂を行った胚が２個あり、うち１個が胚盤胞の段階まで到達した。
• この胚盤胞について、内部細胞塊を分離して、培養皿に移し、フィーダー細胞上での培養を行った。
• 幸いにも、数日後にES細胞の形態をもつ細胞集団が現れて増殖を始めた。
• 細胞の継代増殖方法に関しては、これまでに経験を蓄積しているカニクイザルES細胞ともやや異なり、困難な点があったが、培養方法に改良を加えることによって、細胞増殖を継続させることに成功した。
• 細胞の凍結保存についても、方法と条件を改良することによって、有効な凍結保存が可能になった。
• 今回樹立した細胞株は次のような理由でES細胞株であると考えている。（１）形態学的にES細胞と同じである、（２）ES細胞に特徴的なマーカー遺伝子や蛋白質を発現している、（３）染色体の解析では正常である。
• 培養下でも神経細胞や色素細胞など判別しやすい細胞種への分化能は確認しているが、多種類細胞への分化能の確認に関しては、現在実験が進行中である。
• このヒトES細胞株がこのまま順調に増殖を続ければ、十分な数の凍結ストックを蓄えたのち、細胞分配を開始できる。分配可能となるのは今年１０月から１２月の間と考えている。
• 最初の１株の樹立には成功したが、全国の研究機関への安定した細胞供給による研究の発展のためには少なくとも３-５株が必要であり、今後さらに凍結胚の提供を受けることによって、樹立研究を進めてゆきたい。引き続き提供者と提供医療機関からの協力をお願いしたい。
• ヒトES細胞の分配については、使用研究計画が政府の専門委員会によって審議され文部科学大臣からの確認（承認）を受けた使用研究機関に対して、政府指針第８条に従って、無償（または実費のみ）で分配する予定である。

平成１５年１月

• 提供を受けたヒト凍結胚を解凍し培養したのち、ES細胞株の作成を試みる樹立研究を開始した。

平成１４年６月

• ヒト凍結胚の提供候補者に対して、ES細胞に関する説明プロセスを開始した。

平成１４年４月

• 再生医科学研究所のヒトES細胞株樹立計画について、文部科学大臣による確認（承認）を得た。